大肠杆菌宿主蛋白酶联检测试剂盒是用来定量分析以大肠杆菌为表达细胞 的生物药物中宿主蛋白杂质的试剂盒。首先,用不同浓度的大肠杆菌标准蛋白制 作一条标准曲线,然后再根据标准曲线来分析生物药物中宿主细胞残留蛋白的含 量。具体方法为:先将大肠杆菌标准蛋白或者待测样品适当稀释后加入已包被好 抗大肠杆菌宿主蛋白抗体的96孔平板中。经过1.5小时的保温,宿主细胞蛋白与 已经固定在平板上的抗体结合形成抗原-抗体复合物。此复合物被随后加入的生 物素标记的抗大肠杆菌宿主蛋白的抗体结合并进一步形成更高级的复合物,反应 45分钟后洗去未结合的物质。再加入链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物,静置 30分钟。因链霉亲合素可以与任何带生物素标记的抗体相结合,从而使链霉亲合 素-辣根过氧化物酶复合物连接到平板上。接下来冲洗掉未结合的物质,加入TMB 底物。固相上的酶催化底物产生颜色反应,待颜色反应一段时间后,终止反应。 用酶标仪在450 nm波长下测定其结果,此结果能间接地反应结合到平板上的的宿 主细胞蛋白数量的多少。根据大肠杆菌宿主蛋白标准曲定量分析生物药物中宿主 细胞残留蛋白的含量。
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